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血球计数仪(全自动血球计数仪)

血球计数仪(全自动血球计数仪)

时间:2021-04-09 00:35:44 来源:百思特网 作者:best456

血球计数仪(全自动血球计数仪)用血球计数器进行细胞计数(视频+详解)

下滑看详解!


01清洁实验环境

  • 将消毒液彻底喷洒在层流安全柜内,并用纸巾擦干净。将用过的纸巾放入适当的垃圾桶中。

  • 将70%的乙醇喷洒安全柜内,并用纸巾擦干净。安全柜现已清洁,可供使用。


02处理细胞悬液


  • 从冰箱中取出细胞培养基和胰蛋白酶,放入37℃的二氧化碳培养箱中使其升温。

  • 使用显微镜观察待计数细胞,检查是否有可见的细菌和真菌污染迹象。

  • 用70%的乙醇喷洒培养基瓶和移液管,放入安全柜内。

  • 轻轻晃动培养基瓶以确保悬浮细胞充分混合

  • 在悬浮细胞发生沉淀之前,取0.5毫升的细胞悬液样本,保存在无菌微量离心管中。

  • 去除贴壁细胞上残留的培养基。

  • 用常温的DPBS溶液洗涤,加入EDTA胰蛋白酶使细胞分离(DPBS溶液和蛋白酶的用量见表)。

  • 放置到37摄氏度的二氧化碳培养箱中培养2~5分钟。(培养时长视细胞类型而定)。

  • 取出放倒置显微镜下进行观察,发现胞突回缩、细胞间隙增大以及细胞从培养瓶底分离为单个细胞。

  • 待所有细胞分离完成,37摄氏度含有10%胎牛血清的培养基中和EDTA胰蛋白酶(用量见表)。

用血球计数器进行细胞计数(视频+详解)


  • 上下晃动细胞悬浮液三次,使细胞复苏,然后转移到15毫升的试管中。

  • 在室温下,以每分钟1000转的速度,离心细胞悬浮液,持续5分钟。

  • 离心结束后,弃去细胞混悬液。

  • 然后用37摄氏度含有10%胎牛血清的培养基使细胞颗粒悬浮至原始培养体积。

  • 用5毫升的无菌移液管取0.5毫升的细胞悬液样本转移到无菌微量离心管中。


03准备血球计数器


  • 如果使用玻璃血球计数器和盖玻片,请在使用前用酒精清洁。用水润湿盖玻片,并将盖玻片固定到血球计数器上。如果盖玻片下出现牛顿折射环,则表明盖玻片已正确附着。

  • 如果使用一次性血球计数器百思特网(例如 INCYTO DHC-N01),只需在使用前将其从包装中取出。



04开始计数

  • 取 100 L 细胞放入新的微量离心管中,加入 400 L 0.4% 台盼蓝(最终浓度 0.08%),轻轻混合。

  • 小心地将一滴悬浮液滴入计数室的孔中,使细胞悬液通过毛细管作用被吸入。

  • 使用倒置显微镜,在 10x 物镜下对焦到血球计数器的4*4网格线上。计数未被染色的活细胞计数。

  • 计数时,只计方块内或右边界及下边界线上的细胞。

  • 按同样的方法,必要时也可计数台盼蓝染色的死细胞以估计活细胞的比例。

  • 移动血球计数器到下一组方块(16个),继续计数,直至所有 4 组方块(每组16个)均计数完毕。



05计算活细胞数量


  • 计算每组方块(16个)中细胞计数的平均值并记录它们的值来计算细胞浓度。

  • 取4组16个方格中活细胞的平均数,乘以10000,得到每毫升的细胞数。

  • 乘以5,以修正加入台百思特网盼蓝时的 1:5 稀释。最终值即是原细胞悬液中的活细胞数量/mL。例:

  • 如果每 16 个方块的细胞计数是 50、40、45、52,则平均细胞计数为:

  • (50 + 40 + 45 +52) 4 = 46.75

  • 46.75 x 10000 (104) = 467500

  • 467500 x 5 = 原细胞悬液中 2337500 个活细胞/mL



06计算细胞活力


  • 将活细胞和死细胞计数相加,得到总细胞计数。

  • 活细胞计数除以总细胞计数即计算出百分比活力。

例:

活细胞计数:2337500 个细胞/mL

死细胞计数:50000 个细胞/mL

2337500 + 50000 = 2387500 个细胞

23百思特网37500 2387500 = 97.9% 活力


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